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信息录入:值欧 来自:WWW.SH-ZIOO.COM 人气:1 加入时间:2008-11-20
膜过滤器适用于膜过滤微生物分析检测与膜过滤灭菌。膜过滤微生物分析检测是丢弃过滤液,保留滤膜上的菌检测;而膜过滤灭菌是对热敏性液体如一些糖类、放线菌酮、维生素等,用过滤的方法进行除菌,它采用孔径比最小的细菌细胞还要小的过滤膜,将微生物过滤除去,保存滤液。膜过滤微生物检测分析,适用于每毫升少于1个菌体的柃测试样富集菌体,这种方法能在微生物污染程度很低时进行预先分析。
主要器具与装置:
(1)带漏斗的过滤膜支持架;
(2)抽滤装置:小型真空泵、抽滤瓶;
(3)膜:直径与支持架对应
1 膜过滤器使用前灭菌
实验室使用的膜过滤器多为不锈钢真空过滤器,一般可采用121℃ 、30分钟湿热或160% 、2小时干热灭菌,也可在水中煮沸10分钟灭菌后使用。但由于膜过滤器与接收瓶间及膜过滤器与真宅泵间连接胶管,且滤架及漏斗盖内有胶垫,使抽滤装置的拆装麻烦且多次采用高温灭菌会影响到垫圈与胶管的密封性,因此不易频繁使用上述方法灭菌根据工作目的不同,可采用70% ~75%的乙醇溶液对膜过滤器进行灭菌,灭菌前应先用乙醇仔细地洗净支撑架的表面后打开。
1)微生物分析检测前灭菌:由于保留的是滤膜,灭菌的重点就落在了漏斗及盖子上(包括不锈钢烧结片)。灭菌的难度不大,可先将70% ~75% 的乙醇溶液倒入漏斗内抽滤一次,抽吸至于,然后对漏斗及盖子进行火焰灭菌后备用。
2)膜过滤灭菌:由于保留的是滤液,这就要求埘膜以下各部位严格灭菌。首先将70% ~75% 的乙醇溶液倒入漏斗内抽滤2~3次,此过程要保证乙醇溶液能够彻底布满过滤器底座及连接管(町采用对过滤器底座左右倾斜的方式满足要求);接收瓶及连接胶塞可采用75% 乙醇棉球擦拭灭菌或直接用抽滤的乙醇溶液倾倒灭菌 灭菌结束后,为防止在膜滤时乙醇的残留影响到滤液,可采用无菌水抽滤1~ 2次,以稀释可能残留在膜过滤器内的乙醇一
2 膜过滤器的使用
1)将已灭菌的膜过滤器漏斗取下,使用已用火焰灭菌的镊子将无菌滤膜夹放 支持架上,此时过滤膜的格子面从表面凸起,将漏斗装在滤器底座上,用锁固定,注入试样于无菌的漏斗内:若是啤酒,要缓慢注入防止起泡,过滤浓缩时不使用消泡剂:
2)启动真空泵,打开底座开关进行过滤:滤毕用无菌水对漏斗内壁冲洗(若为过滤除菌,则不须水冲,以免影响滤液浓度)~
3)过滤终了后,须在真空泵仍抽吸的情况下,取下漏斗。
4)停止真空泵。
5)使用已灭菌的镊子,将膜移到含有培养基的平皿内,保温培养或用显微镜观察
6)将漏斗与膜过滤器支持架连接上,启动抽滤装置注入自来水,反复数次,保证各部位清洗彻底,无样液残留。
7)注入70% ~75% 乙醇抽吸至r,以备下次使用:
3 过滤膜的培养
在无菌状态下取出过滤膜,格子面朝上,将膜放在培养基的表面。操作时,要注意膜下面不得进入空气。其适用于过滤啤酒,特别是对瞬时巴氏杀菌的啤酒管理是有用的。
4 膜过滤器操作注意事项
1)以上操作必须在灭菌工作台或无菌室内进行:
2)操作中应注意手不要触及到膜过滤器内侧部位及不锈钢烧结片
3)不锈钢烧结片不宜采用乙醇棉球给予火焰灭菌,以免棉球燃烧灰尽堵塞烧结片孔隙,影响抽滤:
4)做微生物分析检测时注入的试样量,可根据需要进行抽滤 我的经验是熟啤酒样液用量200mL、清酒样液用量50mL、冷麦汁用量lOOmL、刷罐残水lOOmL,经培养计算其中菌的数量。如果试样少于5毫升,可预先与10~20毫升无菌水混合稀释。若试样混浊应进行离心,以防堵塞滤膜。但要保证离心管灭菌彻底,以防二次污染影响到检测结果。
5)过滤膜通常选用黑色或蓝色,表面附有方格。过滤膜的规格选用:
a.过滤除菌选用孔径为0.2~0.4p.m的膜
b.微生物培养选用孔径为0.45/zm的膜
c.酵母的培养或观察选用孔径为0.8/zm的膜
6)滤膜可以是无菌密闭包装,一次性使用;若散装连续使用,可浸泡在2%甲醛溶液中保存
7)灭菌用的70% ~75% 乙醇溶液可重复使用数次,但注意回收后应密封好,以免挥发降低浓度:
8)膜过滤器经过一段时间的使用后,应进行彻底清洗。具体步骤如下:
a 将滤器彻底分解拆卸
b.用中性洗涤剂对滤器的部件进行清洗
c.用热水漂洗,蒸馏水冲洗=也可用70%乙醇溶液漂洗,以加速干燥。
d.在干燥箱中将各部件烘干,切勿用毛巾或布块去擦干,以免留下纤维。
